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眼刺激替代方法-鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM)
时间: 2015-11-09 12:16:17     来源: 申江替代论坛

体外替代技术眼刺激替代方法-鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM

眼刺激试验是化妆品局部毒性安全性评价的重要指标,一般采用兔Draize眼刺激试验进行评价。动物试验给动物造成极大痛苦,各个国家替代验证机构以及化妆品企业均大量开展体外替代方法的研发与验证工作,其中眼刺激替代方法也是目前发展最多的毒理学项目。

鸡胚尿囊膜表面血管丰富,可以看作一个完整的生物体,不像单纯在细胞系上进行的试验,在作为眼刺激替代方法上有较好的潜力。该方法基本原理是鸡胚尿囊膜绒毛膜(CAM)是鸡胚的呼吸膜,血管丰富,紧贴于蛋壳膜下,可看为是一个血管丰富而无感知的系统。利用CAM与兔结膜结构相似的特性,可作为眼刺激性的筛选方法,通过观察CAM暴露后血管的变化(出血、溶血、凝血)检测化学物质对CAM的损伤,可以评价化学物可能的刺激性。HET-CAM 试验作为眼刺激Draize试验的替代方法,该方法参考HET-CAM TEST, INVITTOX PROTOCOL Number 47 (1990), ISSN #0960-2194的内容,该方法已得到国际性验证。

1. 鸡胚生长示意图

2. HET-CAM过程图


3. 试验流程

10日龄鸡胚,去除气室顶端蛋壳,加2-3mL 0.9%生理盐水在蛋壳膜上,顷出,再用弯头眼科镊子小心剥去蛋壳膜,暴露出尿囊膜,观察尿囊膜完整性。每个受试物使用6个鸡胚。吸取或称量样品0.3ml0.3g于尿囊膜上,尽量覆盖表面,暴露5min后(如果样品是固体,接触3min后,用生理盐水轻轻冲洗后顷出),观察并记录试验开始到每一种出血、凝血、血管融解出现的时间或程度,进行刺激性评分,采用时间评估法和终点评分法。



结语:HET-CAM试验适用于企业内部用于眼刺激的筛选和配方/原料的安全性评价,能够区分可能的非刺激性或者轻度刺激物,有效地减少了动物试验;也可用于为管理目的进行风险评估中和物质的标识和分类。

参考文献:

1. 邱璐,李小林,卞俐娜,山口能宏. 鸡胚尿囊膜(HET-CAM) 眼刺激替代试验对产品及原料评价的比较. 中国比较医学杂志,21(3):27-30,2011.

2. 化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验,SN/T2329-2009.

3. INVITTOX PROTOCOL Number 47 (1990).

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