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OECD组织发布两项新体外眼刺激测试指南-OECD491,492
时间: 2015-11-09 12:35:37     来源: 申江替代论坛


亚太经合组织OECD于2015年7月28日同时发布新的体外眼刺激测试指南-OECD491和492,该两项方法均为眼刺激体外测试法,利用兔眼角膜细胞和体外重组角膜表皮细胞作为测试模型,受试物短期暴露或暴露后,通过检测细胞毒性判断受试物的眼刺激性。不难看出,利用兔角膜细胞或体外重组类似角膜表皮也好,都是基于模拟人的角膜细胞,眼刺激损伤可引起角膜受损,也包括虹膜和结膜受损,但有研究表明,角膜损伤占眼刺激约70%,因此,这两种方法具有科学依据。小编对这两种方法并不陌生,在此说说这两种方法。

1.      OECD491-体外短期暴露法-可用于鉴定i)化学物引起严重眼损伤 和ii)不需要用于眼刺激或严重眼损伤分类的化学物。

该方法的原理是利用兔眼角膜细胞SIRC,受试物通过短期暴露5min测试,经过清洗等步骤,加入MTT或CCK-8,测定阴性对照NC和受试物的吸光度,基于NC的吸光度计算受试物的生存率,通过细胞毒性和细胞生存率定量评价受试物的刺激性。化学物引起角膜上皮细胞的细胞毒性是化学物引起角膜上皮损伤和眼刺激重要的作用方式。

联合国化学物危害分类系统判定化学物是否具有危害性,当受试物5%和0.05%浓度引起细胞生存率小于或等于70%,属于UN GHS 1,反之,受试物5%和0.05%浓度引起细胞生存率大于701%则属于No Category。

该方法对于严重眼刺激化学物鉴定时:与体内动物试验相比,准确率为83%,假阳性率为1%,假阴性率为51%。对于假阴性的受试物,5%浓度下生存率<70%,0.05%浓度下>70%,需要利用其它已经过验证的体外方法进行再测试,或者最后的选择-利用动物试验。

对于不需要进行眼刺激性和严重眼刺激分类的化学物鉴定时,与动物试验相比,该方法的准确率为85%,假阴性率为12%,假阳性率为19%。

值得一提的是,上海国检局食品中心早在2007年与日本相关实验室共同参与SIRC STE法的建立与验证工作,并取得非常满意的结果,该项目是我实验室的认可项目,可用于检测服务。基于该项目已发表国际国内会议论文4篇,核心期刊论文2篇,我室具有明确来源的细胞系和技术能力储备,同时支持起草了眼刺激STE法的检验检疫行业标准,近期将发布。

 2.        OECD492 重组类似人角膜表皮测试法-适用于鉴定不需要进行眼刺激或严重眼损伤分类和标签的化学物

该方法基于MatTek公司商业化RhCE模型EpiOcularTM测试受试物引起的细胞毒性,通过MTT测试细胞毒性。该方法不能够用于化学物区分UN GHS Category 1(严重眼损伤)和Category 2(眼刺激)。对于需要进行区分的化学物,可以选用OECD TG 437,438,460 或491。

该方法的基本原理是利用RhCE模型,受试物暴露于组织模型一定时间,MTT法计算细胞吸光度,通过计算受试物暴露后引起角膜上皮的细胞生存率判断受试物的眼刺激性。

当受试物生存率>60%,判为UN GHS No Category;

当生存率≤60%,可判为有刺激,但不能区分UN GHS Categories 1 或2。

我们将积极开展该项方法的验证工作,力争将该方法转移到我们实验室,成为我们的实验室认可项目。

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